对于液相色谱工作者来说,想要保证液相色谱实验的顺利进行,除了确保手上有一支合适的色谱柱之外,选择和配置好实验流动相也是成败的关键因素。通常,用于反相 LC 的流动相可以是纯溶剂、混合溶剂或含有缓冲液和添加剂的溶剂。而实际的流动相配置中有数百种溶剂可供选择,因此配置出符合需求的流动相变得具有挑战性。本期,我们将从流动相的溶剂特性、缓冲液和添加剂选择以及色谱技术对流动相的需求趋势展开介绍。
流动相溶剂特性
流动相的一些特性可以帮助我们为反相分析选择正确的流动相组成。这些特性包括:
溶剂纯度——在 LC 中选择作为流动相的溶剂应为 色谱纯度或质谱级纯度,应进行过滤和超声处理,以确保 UV 光谱中的吸光度最小且不含气泡。
溶剂粘度——反相流动相应为最佳粘度,以帮助确保通过HPLC 柱固定相的最佳线速度,从而提供更窄和更尖锐的峰,因而提高分析的整体灵敏度。
折光率——这是使用示差折光检测器时的一个关键考虑因素。理想情况下,当使用示差检测器时,流动相和样品溶剂应具有相似的折射率以避免出现负峰,换句话说,样品应在流动相中制备。
溶剂沸点——最好选择沸点低的溶剂以提高回收率,特别是在LC-MS 中,挥发性更强的溶剂将改善离子化,从而提高MS 灵敏度。
无腐蚀性——流动相溶剂不得腐蚀流路中的 HPLC 管、泵阀、密封件和其他部件。
溶剂毒性——确保溶剂无毒并且应使用稳定状态下的溶剂。
溶剂混溶性——选择与样品混溶的溶剂。分析物也必须可溶。否则,在色谱柱入口筛板处将产生样品沉淀,从而引发高背压、基线问题、导致分析物峰灵敏度较低以及色谱图中峰面积和峰形问题。
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