飞诺美色谱柱流动相透光度——选择一种在检测波长下可以透射的流动相。
洗脱强度——这是溶剂从固定相中洗脱目标分析物的能力。洗脱强度越高,溶剂越有效,选择性越好。流动相溶剂应具有最佳和足够的洗脱强度,以实现对目标分析物的选择性。
考虑到这些特性,大多数色谱工作者的流动相溶剂是乙腈,因为它具有最佳粘度、良好的 UV 吸光度和足够的洗脱强度。
其他常见的溶剂包括甲醇,甲醇的粘度比乙腈高(特别是与水混合时),还有四氢呋喃,它具有高洗脱强度,但因为毒性更大从而存在安全问题。甲基叔丁基醚可作为四氢呋喃的替代品。
选择流动相缓冲液和添加剂
除了选择流动相溶剂外,还需要选择合适的缓冲液和/或其他添加剂。缓冲液用于控制流动相的 pH 值。酸性添加剂(pH 为 2 至 4)用于大多数制药应用,而碱性流动相(pH 大于 8)用于为碱性分析物实现更高的保留和改善的峰形。
简化的流动相,实验最佳的选择
为反相 LC 选择更简单的流动相已成为常态。这背后的实用性显而易见,随着色谱柱固定相和色谱柱制造技术的进步以及高灵敏度、高分辨率仪器的可及性,减少了对缓冲液和其他添加剂的需求,而这些需求在以前是得到良好色谱所必需的条件。
飞诺美色谱柱
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